假如你看到文章標題激光捕捉顯微鏡切割這八個字，腦子里想到了什么？

  激光，從街頭小販的激光筆到技術(shù)工程師手中的激光測距儀，從救死扶傷的激光手術(shù)到科幻大片中的激光武器裝備……好像并沒什么新奇，但激光捕獲又是什么呢？

  切割用水果刀切橡皮擦到長大，用水果刀切卷心菜，從伐木工用鋼鋸切木材到焊工切金屬材料……人們似乎對切割并不陌生，但顯微鏡切割是什么呢？

  激光捕獲 顯微切割=？？？

  Part 1 顯微鏡切割

  顯微切割（microdissection）在顯微鏡或光學(xué)顯微鏡下，根據(jù)顯微鏡計算機操作系統(tǒng)，從組織、細胞組、細胞組、細胞、細胞成分或性染色切割或細胞玻片中選擇的原材料，進行切割和分離，收集后續(xù)分析的技術(shù)。

  實際上早在1912年，Tschachotin對焦光在分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)中逐漸用于微操作，稱為 Strahlenstich1962年，Bessis激光**與光學(xué)顯微鏡結(jié)合，利用紫外線或紅外激光束切割組織，大大減少了顯微鏡切割對當(dāng)?shù)丶毎車M織的損傷。

  Part 2 激光捕獲顯微鏡切割

  1996中國癌癥研究室病理生理學(xué)實驗室Michael R. Emmert-Buck國家衛(wèi)生研究院Robert F. Bonner其他人明確提出了激光捕獲顯微鏡切割的技術(shù)（Laser capture microdissection）。基本操作流程如下：

  1、根據(jù)倒置顯微鏡測角儀中的機械泵，將準備好的組織切成片固定。

  2、根據(jù)標本采集選擇倒置顯微鏡，調(diào)整光學(xué)顯微鏡，準確定位整體目標區(qū)域。

  3、將含有EVA膜（丁二烯乙烯酸乙烯酯膜）的收集帽放置在當(dāng)?shù)亟M織或細胞中，使用低動能近紅外光譜儀激光直接進入底部，使EVA膜變軟引起粘附力，粘附整體目標組織或細胞EVA然后在膜上與周圍組織或細胞分離。

  4、將切割的組織或細胞遷移到加入提取物的離心管架中DNA、RNA或蛋白質(zhì)，用以下分析。

  一分鐘get新技術(shù)應(yīng)用

  技術(shù)概述：

  激光捕獲顯微鏡切割是一種技術(shù)工具，在顯微鏡下從組織切割到片中分離和凈化單個細胞群或單個細胞。它具有快速、簡單、準確、非特異性強的優(yōu)點，已成為科學(xué)研究組織或細胞非特異表達和分子結(jié)構(gòu)系統(tǒng)的主要專用工具。

  基本概念：

  顯微鏡切割用激光捕獲（LCM）它是根據(jù)一束低紅外激光單脈沖激話熱塑料薄膜，可以選擇性地將整個目標細胞或組織碎片粘在薄膜上。熱塑料薄膜是丁二烯乙酸乙烯酯薄膜，其厚度約為100~200 μm，大的消化吸收峰接近紅外激光波長，可以消化吸收激光引起的大部分動能，瞬間將激光束直射區(qū)域的溫度提高到90°C，然后維持數(shù)ms快速冷卻后，確保分子伴侶不受損壞。低動能紅外激光通常用于試驗，以防止損傷性光化學(xué)反應(yīng)。

  LCM系統(tǒng)軟件包括倒置顯微鏡、固體紅外激光二極管、激光控制設(shè)備、光學(xué)顯微鏡測角儀操作手柄、電蓮藕相機、液晶顯示器等。LCM中用以捕獲總體目標細胞的熱塑封膜直徑通常為6 mm，它通常覆蓋在完全透明的塑料帽上，正好與后續(xù)試驗中常用的規(guī)格 相匹配0.5 ml離心管架一致。

  機械臂懸架可操作覆蓋熱塑料薄膜的塑料帽，存放在干燥組織切片的整體目標位置，在光學(xué)顯微鏡下選擇整體目標細胞。它發(fā)送的激光單脈沖可以立即加熱 EVA膜部分融化EVA膜滲透到切片上*小的組織間隙中，在幾乎ms內(nèi)部快速凝結(jié)。當(dāng)組織和膜之間的粘結(jié)力超過其與蓋玻片之間的粘結(jié)力時，可以完成整個目標細胞可選擇性遷移的過程。激光單脈沖通常是連續(xù)的0.5~5.0ms，它可以在所有塑料帽的表面反復(fù)進行，然后迅速分離出許多整體目標細胞。塑料帽蓋在配有緩沖溶液的離心管架上，將選定的細胞遷移到離心管架上，并根據(jù)分離出感興趣的分子結(jié)構(gòu)來完成后期試驗。

  論文參考文獻：

  Michael R. Emmert-Buck,Robert F. Bonner,Paul D. Smith,et al. Laser Capture Microdissection. Science,1996,274(5289): 998-1001.

  S. Thalhammer,J. Geigl,A. Zink,et al. AFM and Laser Microdissection as Tools for Life Sciences. Acta Microscopica,2003,12(sup A) :1-4.